elisa原理实验条件和技术要点
2011-06-07
在应用ELISA时，首先要清楚下面内容：
1，是检测抗体还是抗原?
2，检测的结果是定性还是定量?
3，是否需要检测特异抗体的类型?
4，所用抗体/单克隆抗体的亲和力怎样?
(1)检测抗原
最常用于检测抗原的方法是非竞争性的双抗体夹心法，其次是竞争法。但竞争法在具体实验中有些困难，特别是检测微生物的抗原，因为需要标记抗原，这对于某些抗原是很难做到的，甚至是不可能的。另外在竞争法中，酶标记的抗原与标本直接混合在一起，许多标本中含有酶抑制剂或蛋白A样物质，可影响ELISA的结果。
(2)检测抗体
检测抗体种类常用的方法是检测抗体种类的捕获法，这个方法常用于检测特异性IgG、IgA和IgM.。这个方法的第一步是捕获所需要检测的一个种类的抗体，接下来是检测捕获的抗体是否是特异性抗原的抗体。间接ELISA在检测IgG时比较简单，但不适用于检测其他种类的抗体，因为血清中如果有特异IgG存在将与IgM或IgA等竞争结合抗原。
竞争法检测抗体有两种方法：一种是将标记的抗体和标本同时加入反应孔内，但标记的抗体和标本中的抗体必须是结合抗原的不同决定簇;另一种是先加标本，冲洗后再加标记的抗体。
竞争法检测抗体比间接法容易判断结果，并且比较敏感和特异。
不论选择哪种方法，ELISA都包括6个步骤：
1，抗原或抗体吸附于固相;2.加标本和试剂;3，孵育和冲洗;4，加酶标抗原或抗体;5，加适当的底物;6，检测和分析结果。
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